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Western信號(hào)增強(qiáng)劑

簡(jiǎn)要描述:

Western信號(hào)增強(qiáng)劑公司正在出售的產(chǎn)品:小鼠惡性肉瘤細(xì)胞 CAP1封閉多肽 古柏線蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠髓過(guò)氧化物(MPO)試劑盒 ELISA 水樣中汞離子(Hg2+)濃度活性比色法檢測(cè)試劑盒 奇異假芽孢桿菌 FRG2B蛋白抗體

更新時(shí)間:2024-01-12

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Western信號(hào)增強(qiáng)劑

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

A-PJ1106

Western信號(hào)增強(qiáng)劑

100ml

描述:在蛋白的轉(zhuǎn)印過(guò)程中,電流對(duì)抗原有一定的損傷,從而導(dǎo)致后續(xù)抗體無(wú)法識(shí)別抗原結(jié)構(gòu)。本 Western 信號(hào)增強(qiáng)劑含有的成分,可以修復(fù)抗原結(jié)構(gòu),使抗原處于更利于抗體識(shí)別的狀態(tài)。通常使用該溶液修復(fù)抗原后,可極大提高檢測(cè)的靈敏度(提高 3~10 倍)、提高低豐度蛋白的檢測(cè)效率,除此外,可以節(jié)約一抗的使用量。儲(chǔ)存:4°C,可保存 2 年。
操作方法
1. 轉(zhuǎn)膜結(jié)束后,將 NC 膜(或 PVDF)轉(zhuǎn)入適量 Western BlotSignal Enhancer 中,室溫孵育 20min。
2. 倒掉 Western Blot Signal Enhancer 溶液,直接進(jìn)行下一步的封閉、一抗孵育、二抗孵育等后續(xù)操作。
注意:轉(zhuǎn)膜結(jié)束后的膜不易長(zhǎng)時(shí)間浸泡于 Western BlotSignal Enhancer 中,否則會(huì)導(dǎo)致膜破碎。

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥(niǎo)苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱(chēng)接合,復(fù)性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時(shí)間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

牛皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

γ谷氨酰半胱氨合成ELISA試劑盒 γ-ECS免費(fèi)代測(cè)試劑

鼠肺炎病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

節(jié)片代凡絳蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

蛋白激抑制因子αELISA試劑盒 PKIα免費(fèi)代測(cè)試劑

問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo)

人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA-B)核檢測(cè)試劑盒

半胱氨豐富跨膜BMP調(diào)節(jié)因子1ELISA試劑盒

馬科研PCR檢測(cè)試劑盒

空腸彎曲菌PCR檢測(cè)試劑盒

蛋白3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體ELISA試劑盒

馬節(jié)桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

貓庖疹病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

端粒逆轉(zhuǎn)錄ELISA試劑盒

嗜皮菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

平尾毛細(xì)線蟲(chóng)染料法熒光定量PCR試劑盒

多免疫球蛋白受體ELISA試劑盒

對(duì)蝦桃拉病毒(TSV)核檢測(cè)試劑盒

葡萄孢菌PCR檢測(cè)試劑盒

耳椎蛋白90ELISA試劑盒

禽傳染性支氣管炎病毒JMK型探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

貓庖疹病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

發(fā)動(dòng)蛋白2ELISA試劑盒

雷斯頓埃博拉病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

貓傳染性腹膜炎(FIP)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

芳基硫酯GELISA試劑盒

諾如病毒G5型探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

皰疹病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

肺炎衣原體抗原ELISA試劑盒

馬爾太蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒

流感病毒N6亞型PCR檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

人彈性蛋白2,中性粒細(xì)胞(ELA2)試劑盒ELISA

禽傳染性支氣管炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒

牛茨城病病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

人細(xì)胞毒(CTX)ELISA試劑盒

瓜納圖巴病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

腸道病毒D組探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

Western信號(hào)增強(qiáng)劑人半乳糖凝集-7(Gal-7)檢測(cè)試劑盒elisa

小孢子酒曲菌PCR檢測(cè)試劑盒

麻風(fēng)分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

β羥丁(β-OHB)ELISA試劑盒

腸出血性大腸桿菌O157血清型染料法熒光定量PCR試劑盒

牛源性成分(Bovine)核檢測(cè)試劑盒

人促胰液/分泌受體(SR)ELISA試劑盒

病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)核檢測(cè)試劑盒

 


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